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测量蛋白质浓度(Bradford、BCA 等)

    

BCA 分析是一种两步比色分析,用于定量样品中的总蛋白质。该测定使用双缩脲反应,其中 Cu 2+在碱性介质中被蛋白质还原为 Cu 1+。氨基酸主链与铜分子形成颜色螯合复合物,允许对亚铜阳离子进行高灵敏度和选择性检测。所得的水溶性复合物具有很强的吸光度,可以在酶标仪上进行测量。原始 Pierce ™ BCA 蛋白检测试剂盒需要在 37 ° 下孵育 30 分钟C 并产生在 562 nm 处测量的颜色变化。该检测的更新版本,即 Pierce Rapid Gold BCA 蛋白质检测试剂盒,只需在室温下孵育 5 分钟即可产生在 480 nm 处测量的强烈橙金色。

多模式酶标仪包括吸光度检测模式,最适合蛋白质定量分析。在此,我们将说明如何使用  读码器与  软件结合使用两种不同的试剂盒(Pierce BCA 蛋白质检测试剂盒和 Pierce Rapid Gold BCA 蛋白质检测试剂盒)对细胞蛋白质样品进行定量。该试剂盒包括牛血清白蛋白,用于建立标准曲线,从中插入样品浓度并通过 软件中的预配置方案自动报告。与 37 ° 下的 30 分钟孵育相比,用于 Rapid Gold BCA 测定的室温孵育 5 分钟原始套件所需的 C,可节省时间和方便。