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比尔-朗伯定律, 吸光度测量

    

紫外可见/近红外分光光度计测量透射率或由之比来的入射光(的强度通过样品透射的光的量余0)到透射光(强度)。

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透射率和吸光度之间的关系由以下等式描述

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吸光度测量经常用于通过利用比尔-朗伯定律来量化未知样品的浓度,该定律描述了光如何根据它通过的材料衰减。透射率和吸光度与样品的浓度c、摩尔吸光率ε和比色皿光程长度l成正比。

样品吸收的光量取决于与之相互作用的分子数量。样品浓度越高,存在的分子越多,吸光度越高。同样,细胞的光程越长,光穿过样品的距离就越大,从而增加与之相互作用的分子数量,从而增加吸光度。为了比较具有不同浓度或光程长度的两种溶液的吸光度,需要有一个常数变量来标准化数据。此外,要通过测量吸光度来确定样品的浓度,必须知道细胞路径长度和生色团的电子跃迁强度。这个常数或发生电子跃迁的概率是摩尔吸收率。

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除了透射和吸收之外,紫外-可见光谱还可以测量样品的反射率,或表面反射入射光总量的有效性。当光线照射到材料表面并导致光波方向发生变化时,就会发生反射。有两种类型的反射率:镜面反射率和漫反射率,其中两个分量的总和是总反射率。镜面反射是与入射光束以相同角度反射的光,漫反射是与入射光在不同方向反射的光,如图 4 所示。