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紫外显微镜和显微光谱分析红细胞

    

PV 显微分光光度计是一种理想的解决方案,它以简单、快速和非破坏性的方式分析生物材料。对于这些实验,20/20 PV 被配置为用于单个红细胞的 UV 范围吸收显微镜和光谱。

通过吸收显微光谱和紫外透射显微成像研究氟化钙基质上的红细胞样本。观察到一些细胞包含在细胞中心形成的大约 1μm 直径的黑点。进行了有和没有黑点的细胞光谱的测量和比较。

在使用来自 CRAIC Technologies 的 20/20 PV 显微分光光度计进行的吸收显微光谱分析期间,每次测量平均 20 次扫描,光谱范围为 250 至 850 nm。使用宽带紫外-可见-近红外光进行成像和光谱实验。样品基板上的空白空间被视为参考。

用于微光谱分析的孔径如下表所示:

测量

以下部分给出了从 CRAIC Technologies 的 20/20 PV 显微分光光度计获得的测量结果。

有黑斑的红细胞

图 1 显示了样本载玻片中一组红细胞的放大图像。 观察结果如下:

方框中显示的细胞被假定为具有黑点的红细胞

中心框内显示为黑色方块的采样区域的尺寸为 1.5µm x 1.5µm (A6)

在 500 nm 以上,观察到光谱显示出一系列波长的吸收峰

血细胞边缘和中心的显微光谱

下面显示的两个图显示了在红细胞的中心和边缘拍摄的光谱,它确定了细胞内化合物的区别。这里使用了 A6 光圈。

微信图片_20211014154641.png

一种。有黑斑的红细胞

中心区域显示的光谱在波长 275 和 417 nm 处具有吸收峰。光谱在 500 nm 以上的波长处显示不同的曲线。

具有暗点的细胞的光谱

中心区域的光谱在 417 nm 处显示吸收峰,而边缘的光谱没有显示任何吸光度。

使用 CRAIC Technologies 的 20/20 PV 显微分光光度计进行成像分析。

以下图像是在与样本幻灯片相同的地方拍摄的。成像波长为白光,分别为 415、281、267 和 232 nm


微信图片_20211014154719.png

结果

吸收显微光谱分析结果

获得了有和没有黑点的红细胞的吸光度光谱,所得结果如下:

有和没有黑点的红细胞在波长 275 和 417 nm 处表现出吸收峰

没有黑点的细胞在 275 和 417 nm 处的峰值振幅之间的差异远大于有黑点的细胞

对于没有黑点的细胞,中心区域光谱显示 417 nm 的吸收峰,而边缘区域没有显示峰

有黑点的细胞的光谱在 500 nm 以上的不同位置显示吸收峰,而没有黑点的细胞则没有吸收峰

中心区域有暗点的细胞的光谱在 500 nm 以上吸光度增加,而边缘的光谱吸光度降低

紫外显微成像结果

进行紫外显微成像以研究有无黑斑的红细胞。分析结果如下:

在 280 nm 波长处,蛋白质吸收光;因此,UV 成像被认为是一种用于绘制蛋白质分布图的快速而精确的技术。

在 415 nm 波长处,由于血红素基团的作用,观察到细胞的对比度增强,它反映了红细胞中血红蛋白的浓度和定位。

紫外显微成像还可用于监测核酸,因为它们的最大光吸收波长约为 260 nm。